1★◆■■■.实验操作时需戴手套、穿工作衣★■■■，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理★★★◆■。

　　8■◆.每孔依次加底物液A◆★、底物液B各50μl，混匀■◆■■★，盖好盖板膜公海赌船◆★★，置37℃避光反应10分钟★★◆★◆。

　　3★★★.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。

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　　2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。

　　1◆★.取动物全血按常规方法制备血清◆★◆★■★，要求血清清亮■◆◆★★◆，无溶血■■◆■■、无污染。样品1周内可于2～8℃保存■◆◆◆■★，长期需置-20℃保存。

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　　【适用仪器】含450nm★■◆■★■、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器■★★。

　　猪圆环病毒病是由猪圆环病毒Ⅱ型（Porcine Circovirus 2★◆■■■◆，PCV2）引起的猪的一种多系统功能障碍性疾病，其临床表现多种多样，主要为断奶仔猪多系统衰竭综合症★◆◆★、猪皮炎与肾病综合征◆■★、母猪繁殖障碍等。

　　本试剂用于检测猪血清中猪圆环病毒Ⅱ型抗体★■，可用于猪圆环病毒Ⅱ型疫苗免疫效果评价■■★◆★。如在使用过程中遇到问题，请与广州华南生物工程有限公司技术人员联系。

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　　【参考值】实验正常的情况下，阴性对照的平均OD值即ODNC应≤0★◆■★.3，阳性对照的平均OD值即ODPC应≥0◆■★◆★◆.6。

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　　5.甩去孔内液体■★■◆，每孔加350μl工作洗涤液，静置30秒后弃去■★★◆★■，重复洗涤5次，最后一次拍干■◆◆■■。

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　　本试剂盒由预包被猪圆环病毒Ⅱ型重组cap蛋白的酶标板◆◆■、酶标记物及其他配套试剂组成◆◆，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测猪血清、血浆样本中猪圆环病毒Ⅱ型抗体★■★。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本，经温育后若样品中含有猪圆环病毒Ⅱ型抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的其他成分后■◆■；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合★◆■◆★；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加TMB底物液，与酶标结合物反应形成蓝色产物★★■★★，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色■◆★■◆；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有猪圆环病毒Ⅱ型抗体。

　　3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解★★◆★■，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液(如19份蒸馏水或去离子水+1份浓缩洗涤液)★■◆■。如在使用过程中遇到问题，请与广州华南生物工程有限公司技术人员联系。

　　2.用样品稀释液将待检血清按40倍稀释（如5μl血清加入195μl样品稀释液中，混匀）■★■■。阴■◆■◆、阳性对照不用稀释★■。

　　该试验仅作为定性检测猪血清、血浆中猪圆环病毒Ⅱ型抗体，根据SP值高低可作抗体水平强★★■◆■★、中★■■★◆、弱的粗略评估★★◆★★。

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　　3.阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl；样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。

　　2.取所需用量酶标板条，设阴性/阳性对照各2孔■◆，未用的板条尽快密封■★◆★◆★，2～8℃保存■◆◆◆。

　　9.每孔加终止液50μl◆■★■，混匀，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值。